【原理】 肺炎支原體快速檢測卡可檢測血清中的肺炎支原體lgM抗體。患者的血清樣品分別加入兩個測試孔內(nèi)，當(dāng)樣品沿膜擴散時，分別加入3滴抗人lgM堿性磷酸酶復(fù)合物、3滴洗液和2滴底物，5分鐘后觀察結(jié)果。質(zhì)控孔為質(zhì)量控制，固定有人lgM，測試孔固定有肺炎支原體抗原。陽性反應(yīng)結(jié)果為藍色，陰性結(jié)果為無色。

【材料】

1、患者血清。

2、肺炎支原體lgM檢測試劑盒，包括：

（1）檢測卡：單獨錫紙包裝，卡上固定有肺炎支原體抗原或人lgM（質(zhì)控孔）。

（2）陽性質(zhì)控液（1.7ml）：含有人抗肺炎支原體lgM的0.1%疊氮鈉緩沖液。

（3）陰性質(zhì)控液（1.7ml）：0.1%疊氮鈉緩沖液。

（4）酶結(jié)合物：（11ml）：含有以堿性磷酸酶標(biāo)記的抗人lgM單克隆抗體的0.1%疊氮鈉緩沖液。

（5）洗液：9.5%（W/V）的呱基氫氯酸。

（6）底物（15ml）：含有5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸的0.1%疊氮鈉的緩沖液。

（7）移液管。

【樣本處理】血清樣品2—8℃可保存3天，如果不能在此期間測試，-20℃保存，樣品不宜反復(fù)凍融。

【操作】

1、從冰箱中取出試劑盒，置室溫平衡20分鐘。

2、從錫紙袋中取出檢測卡，作好標(biāo)記。

3、用移液管滴加2滴血清到卡下端兩個測試孔中。

4、22—25℃下孵育2分鐘。2分鐘內(nèi)血清應(yīng)沿膜擴散至上端的測試孔中。

5、加入3滴酶結(jié)合物到下端兩個測試孔中，22—25℃下孵育2分鐘，酶結(jié)合物應(yīng)沿膜擴散至上端的測試孔中。

6、加入3滴洗液到上端兩個測試孔中，等待*吸收。

7、滴加2滴底物試劑到上端兩個測試孔，22—25℃下孵育5分鐘，5分鐘后立即觀察反應(yīng)結(jié)果。

【結(jié)果】  根據(jù)上端兩個反應(yīng)孔的反應(yīng)結(jié)果判斷：

陽性結(jié)果：上端兩孔都出現(xiàn)藍色。提示肺炎支原體性lgM存在。

陰性結(jié)果：質(zhì)控孔出現(xiàn)藍色或輕微藍色，測試孔無色或呈暗灰色，提示不存在肺炎支原體lgM或其濃度在檢測下限之下。

無效反應(yīng)：質(zhì)控孔不出現(xiàn)藍色。產(chǎn)生無效反應(yīng)的可能原因為：試劑或檢測卡質(zhì)量問題，操作不當(dāng)，樣品擴散不好，酶結(jié)合物嚴(yán)重污染，血清中含有過多脂質(zhì)成分等。無污染血清可離心后再次測試 。

【特異性】該試劑盒與下列因素不發(fā)生交叉反應(yīng)：腺病毒、風(fēng)濕因子、呼吸道合胞病毒、抗核抗體、流感病毒A型和B型、副流感病毒3型、組織胞漿菌、巨細胞病毒等。